강선영 (국립창원대학교)

임재민 (국립창원대학교)

강선영 (국립창원대학교)

임재민 (국립창원대학교)

In Saccharomyces cerevisiae, O-glycosylation is a major post translational modification in which mannose residues are attached to serine or threonine residues of proteins. These O-glycans play essential roles in protein stability, localization, and function, and their structures can vary depending on physiological or environmental conditions. To explore the relationship between glycan structure and cellular function, various mass spectrometry-based methods combined with stable isotope labeling have been developed for the relative quantification of glycans. Among these, the Metabolic Isotope Labeling of Glycans Using Isotopic Glucose for Quantitative Glycomics (MILPIG) approach enables in vivo labeling of glycans by culturing yeast in media containing ¹³C-labeled glucose (1,2-¹³C₂ glucose). This strategy allows for the generation of isotope-labeled glycans, facilitating precise and comparative glycomic analysis in yeast systems. In this study, we applied MILPIG to Saccharomyces cerevisiae for quantitative O-glycomics. Yeast was grown in media containing either unlabeled or 1,2-¹³C₂-labeled glucose, enabling in vivo incorporation of isotope-labeled O-glycans. The 2 Da mass shift per sugar unit improved spectral separation compared to conventional 1 Da labeling. Relative quantification was achieved by comparing mass spectral peak areas. We demonstrated that MILPIG enables robust quantitative O-glycomic analysis in yeast under various environmental conditions, including treatment with methyl α-D-mannopyranoside, a mannose analog that interferes with mannose metabolism. O-glycosylation changes in response to this treatment were effectively detected, highlighting the versatility of MILPIG in monitoring dynamic glycan alterations.​